四种核酸染料对用LAMP方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的影响

作     者：袁向芬 吴绍强 林祥梅 Yuan Xiangfen;Wu Shaoqiang;Lin Xiangmei

作者机构：中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所北京100029 

基　　金：质检公益性行业专项(201210018) 国家科技支撑计划课题(2013BAD12B00) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2015年第32卷第2期

页      码：72-77页

摘      要：本研究旨在建立一种基于颜色变化的北美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)RT-LAMP检测方法及结果判定方法,方便LAMP技术的现场检测应用。根据Gen Bank中美洲型PRRSV的保守序列设计一套LAMP引物,对反应进行优化后建立了PRRSV LAMP检测方法。对比Dye63、钙黄绿素(Calcein)、SYBR Green I和Picogreen 4种核酸染料对于LAMP反应的适用性。结果显示,只有Calcein、Dye63适于LAMP反应前加入,但对扩增效率均产生一定抑制,造成反应时间延迟:Calcein的延迟作用更强(约10min),Dye63延迟作用较小(约5min)。加入Dye63的LAMP反应灵敏度为2×101拷贝,而加入Calcein的灵敏度要低10倍。经多功能酶标仪对荧光强度的检测,含Dye63的反应阴阳性差异明显,可用于LAMP反应结果的判定。据此建立的基于新型核酸染料Dye63的PRRSV RT-LAMP检测方法操作简单、方便、直观,可大大减少环境污染造成的假阳性。Dye63有望成为继Calcein之后,可用于LAMP反应前加入,反应后闭管判定的一种新核酸染料,方便LAMP检测技术现场应用。

主 题 词：PRRSV 环介导等温扩增 检测方法 核酸染料 比较 结果判定 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2015.02.026

馆 藏 号：203204235...