RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用

作     者：张帆 唐振宁 杨新华 徐琰 范林军 张毅 陈莉 周艳 陈庆秋 姜军 ZHANG Fan;TANG Zhen-ning;YANG Xin-hua;XU Yan;FAN Lin-jun;ZHANG Yi;CHENG Li;ZHOU Yan;CHEN Qin-qiu;JIANG Jun

作者机构：第三军医大学西南医院乳腺疾病中心重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30700814) 第三军医大学2006年度中青年科研基金资助项目 

出 版 物：《中华乳腺病杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Breast Disease(Electronic Edition))

年 卷 期：2011年第5卷第2期

页      码：36-39页

摘      要：目的构建针对骨保护素(OPG)基因的一个载体编码三条短发夹RNA(shRNA)的真核表达质粒,观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法选择3个针对OPG基因的RNA干扰(RNAi)位点,分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链,每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1.1、pGenesil-1.2、pGenesil-1.3连接形成pGenesil-1.1-shRNA1、pGenesil-1.2-shRNA2、pGenesil-1.3-shRNA3,对以上重组载体反复酶切连接,构建成重组质pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,酶切鉴定和测序无误后,将该质粒转染MDA-MB-231细胞,以G418加压筛选,对转染细胞行单克隆化,稳定转染细胞行RT-PCR和Westernblot检测,确定其对OPG基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果成功构建了pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒;以该质粒稳定转染MDA-MB-231细胞后其OPGmRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义(P<0.05),RNAi对OPGmRNA和蛋白的表达抑制率分别为91%和73%。结论本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒,通过RNAi抑制了MDA-MB-231细胞OPG基因表达,为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。

主 题 词：乳腺肿瘤 骨保护素 RNA干扰 MDA—MB-231细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-0807.2011.02.010

馆 藏 号：203204352...