HCV RNA基因分型多色荧光PCR筛查和确认方法的建立

作     者：马洪滨 李永利 刘立明 王雪飞 朱剑功 杨宁 李妍 庞君丽 洪炜 王大刚 王海滨 MA Hong-bin;LI Yong-li;LIU Li-ming;WANG Xue-fei;ZHU Jian-gong;YANGNing;LI Yan;PANG Jun-li;HONG Wei;WANG Da-gang;WANG Hai-bin

作者机构：解放军第302医院临床检验中心北京100039 

出 版 物：《中华临床医师杂志（电子版）》 (Chinese Journal of Clinicians(Electronic Edition))

年 卷 期：2012年第6卷第1期

页      码：80-83页

摘      要：目的建立多色荧光丙型肝炎基因分型检测方法。方法针对HCV5 NCR区特异性基因设计一对通用引物和Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ型特异性探针,Ⅰ型和Ⅲ型探针标记FAM荧光染料,Ⅱ/Ⅳ型标记VIC荧光染料,分别建立Ⅰ/Ⅱ型和Ⅲ/Ⅳ型两管双色荧光PCR扩增系统。分别采用测序和本研究方法对97份丙型肝炎阳性血清进行分型,比较两种方法分型结果的一致性,并对双色荧光法检测的2889例HCV分型结果进行分析。结果在97份丙型肝炎阳性血清中,双色荧光法分出Ⅰ型65例(67.0%),Ⅱ型25例(25.8%),Ⅲ型2例(2.1%),Ⅰ/Ⅱ混合型3例(3.1%),有2例HCVRNA定量为(1～3)×103IU/ml弱阳性标本未分出型;测序法分出Ⅰ型61例(62.9%),Ⅱ型24例(24.7%),Ⅲ型2例(2.1%),Ⅰ/Ⅱ混合型2例(2.1%),有8例HCVRNA定量结果为(1～5)×103IU/ml的阳性标本测序法未分出型,有1例Ⅰ/Ⅱ混合型标本测序无法判断,而荧光法分型明确。我院采用本研究建立的方法检测2889例临床丙型肝炎标本,2268份分出基因型,其中Ⅰ型1545例(68.1%),Ⅱ型702例(31.0%),Ⅰ/Ⅱ混合型18例(0.8%),Ⅲ型3例(0.1%),高HCV载量血清全部涵盖在Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型中,未发现Ⅳ型和其他型的病例。结论本研究建立的双色荧光HCV基因分型的方法具有良好的敏感性、特异性、可重复性且省时省力,由于近99%的HCV阳性血清为Ⅰ/Ⅱ型,所以临床可选择Ⅰ/Ⅱ型试剂进行常规检测,对高病毒载量而非Ⅰ/Ⅱ型的标本可采用Ⅲ/Ⅳ型试剂进一步分型明确。

主 题 词：逆转录聚合酶链反应 多色荧光 HCV分型 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2012.01.023

馆 藏 号：203204418...