大赖草ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

作     者：代培红 周贵玲 苏秀娟 李月 刘超 吾买尔夏提.塔汉 Dai Peihong;Zhou Guiling;Su Xiujuan;Li Yue;Liu Chao;Wumaierxiati Tahan

作者机构：新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052 新疆农业大学草业与环境科学学院乌鲁木齐830052 

基　　金：国家自然科学基金项目(31160134)资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2016年第14卷第10期

页      码：2732-2738页

摘      要：本试验的目的在于建立大赖草最佳的ISSR-PCR反应体系。以大赖草基因组DNA为模板,利用单因子实验相结合正交试验设计的方法,对PCR体系的各因素(d NTPs,DNA及引物等)进行优化试验,同时筛选出扩增条带清晰、稳定性好的ISSR引物并确定其退火温度。试验表明,经优化后的PCR体系:在25μL体系中,DNA用量为50 ng、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、引物的浓度为0.4μmol/L、d NTPs的浓度为0.3 mmol/L、和Mg2+的浓度为2.5 mmol/L。体系验证试验表明该体系稳定、可靠,另外筛选出10条较好的引物,可用于后续的大赖草遗传多样性分析及亲缘关系分析、基因定位与克隆、连锁图谱构建等方面的研究,并对其它近缘作物有指导意义。

主 题 词：大赖草 ISSR-PCR 单因子试验 正交设计 引物筛选 

学科分类：090503[090503] 0909[0909] 0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.13271/j.mpb.014.002732

馆 藏 号：203208245...