沉默DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞增殖、ALP活性和钙离子浓度影响研究

作     者：万雷 黄宏兴 黄红 柴生颋 张志海 魏合伟 王凡 王吉利 

作者机构：广州中医药大学附属骨伤科医院骨科广东广州510240 广州中医药大学广东广州510405 

基　　金：国家自然科学基金课题(81302991) 广东省自然科学基金课题(S2013040016828 2014A030310127) 广东省科技计划项目(2013B021800058 2016A020216024) 广州中医药大学青年英才项目(QNYC20120119) 2014广东省"优青计划"项目(yq2014041) 

出 版 物：《中国骨质疏松杂志》 (Chinese Journal of Osteoporosis)

年 卷 期：2016年第22卷第11期

页      码：1361-1369页

摘      要：目的构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度影响作用。方法设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列(Scr),构建DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,用q PCR法和蛋白印记(Western blot)法选出沉默效率最好的扩增DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,并用荧光显微镜观察计算病毒滴度。MG63细胞被分成空白对照组、沉默DKK1(Ad-sh DKK1)组、沉默Sost(Ad-sh Sost)组、沉默DKK1+Sost(Ad-sh DKK1+Ad-sh Sost)组4组,分别用优选出的沉默效率最好的sh DKK1和sh Sost腺病毒载体转染MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测观察细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度。结果 1DKK1 p Ad-sh DKK1-1和Sost p Ad-GFP-shRNA-2沉默效率最高;2与空白对照组对比,沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默DKK1+Sost组的细胞光吸收值(OD)、ALP活性测定值均升高,而钙离子浓度均降低,以沉默DKK1+Sost组变化最明显,组间比较具有统计学差异(P<0.01和P<0.05)。结论 DKK1、Sost沉默可促进MG63细胞增殖、提高ALP活性,降低钙离子浓度,尤以二者同时沉默时的作用最强。

主 题 词：DKK1 Sost 沉默基因 重组腺病毒 MG63细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-7108.2016.11.001

馆 藏 号：203208374...