利用Red重组系统对大肠杆菌ClpP基因的敲除

作     者：白光兴 孙志伟 黄莺 俞炜源 BAI Guang-Xing;SUN Zhi-Wei;HUANG Ying;YU Wei-yuan

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

基　　金：国家高技术研究发展计划 (863计划 )十五课题 (No .2 0 0 1AA2 15 3 5 1) 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2005年第21卷第1期

页      码：35-38页

摘      要：利用含有质粒pKD4 6的菌株BW2 5 113,在阿拉伯糖诱导后 ,表达λ噬菌体的 3个重组蛋白 ,宿主菌就具有了同源重组的能力 .设计的引物 5′端有 5 0bp的拟敲除基因的同源臂 ,3′端为扩增引物 ,以pKD3为模板 ,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因 ,将此线性片段电转入具重组功能的感受态细胞 ,利用氯霉素平板就可以筛选到阳性转化体 .再利用表达Flp重组酶的质粒pCP2 0 ,可将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除 .利用该重组系统 ,构建了ClpP蛋白酶缺失的大肠杆菌工程菌株 ,可望在减少外源蛋白的降解方面发挥一定的作用 .

主 题 词：ClpP FLP重组酶 FRT位点 Red重组酶 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-7626.2005.01.014

馆 藏 号：203208411...