基于CRISPR/Cas9系统的OsbHLH116基因编辑及其脱靶效应分析

作     者：杜彦修 季新 陈会杰 彭廷 张静 李俊周 孙红正 赵全志 DU Yan-xiu;JI Xin;CHEN Hui-jie;PENG Ting;ZHANG Jing;LI Jun-zhou;SUN Hong-zheng;ZHAO Quan-zhi?

作者机构：河南农业大学农学院/河南粮食作物协同创新中心/河南省水稻生物学重点实验室郑州450002 

基　　金：河南省现代农业技术体系专项经费资助项目(S2012-04-02) 

出 版 物：《中国水稻科学》 (Chinese Journal of Rice Science)

年 卷 期：2016年第30卷第6期

页      码：577-586页

摘      要：以水稻OsbHLH116基因为编辑对象,根据基因编码区序列(CDS)在第一外显子区域设计长度为19bp的sgRNA,化学合成sgRNA的寡核苷酸序列,然后与CRISPR/Cas9系统表达载体pBUN411连接,再用农杆菌介导法获得水稻转基因株系,最后利用酶切和测序相结合的方法对OsbHLH116突变体进行了筛选鉴定和脱靶效应分析。结果表明,所构建的pBUN411-gRNA载体成功实现了对基因OsbHLH116的定向编辑。酶切分析表明在选取的10株T0代转基因苗中得到了6个OsbHLH116突变单株。对6个突变单株进行了TA克隆测序分析,发现了纯合突变、双等位突变和杂合突变3种类型。酶切分析表明2个潜在脱靶位点均未发生脱靶效应。

主 题 词：水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 脱靶效应 OsbHLH116 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.16819/j.1001-7216.2016.6024

馆 藏 号：203208853...