Bcl-2 siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定

作     者：许可慰 黄健 林天歆 郭正辉 胡明 尹心宝 潘秋辉 XU Ke-wei;HUANG Jian;LIN Tian-xin;GUO Zheng-hui;HU Ming;YIN Xin-bao;PAN Qiu-hui

作者机构：中山大学附属第二医院泌尿外科广东广州510120 中山大学附属第二医院医学研究中心广东广州510120 

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(No.06021283) 广东省医学科研基金资助项目(No.A2006206) 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2007年第23卷第5期

页      码：972-976页

摘      要：目的:构建bcl-2特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步观察其对膀胱癌细胞生长的影响。方法:根据GenBank提供的bcl-2cDNA序列,设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与含U6启动子的pGenesil-1质粒定向连接,构建真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1555。经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。转染T24细胞,采用半定量RT-PCR观察重组质粒对bcl-2 mRNA表达的影响;用MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用。结果:构建了bcl-2siRNA的真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1555,并经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。转染T24细胞72h后,RT-PCR显示bcl-2基因表达下调接近80%;MTT发现T24细胞的体外生长受到明显抑制。结论:bcl-2的特异性siRNA真核细胞表达载体成功构建,有效沉默bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,抑制了癌细胞的生长。

主 题 词：膀胱肿瘤 RNA干扰 基因 bcl-2 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2007.05.032

馆 藏 号：203209182...