A型肉毒毒素多表位串联体的设计、表达、纯化及鉴定

作     者：贾杨 王俊虹 高姗 康琳 王景林 JIA Yang;WANG Jun-Hong;GAO Shan;KANG Lin;WANG Jing-Lin

作者机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原与生物安全国家重点实验室北京100071 武警医学院天津300162 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30370081) 

出 版 物：《军事医学科学院院刊》 (Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences)

年 卷 期：2007年第31卷第3期

页      码：213-217页

摘      要：目的:设计、表达两个A型肉毒毒素多表位串联体。方法:从文献报道的A型肉毒毒素(botulinum neuro-toxin type A,BoNT/A)的表位及生物信息学方法预测得到的B细胞表位中遴选表位,并加入适当的辅助性元件,设计多表位串联体A、B。对其基因进行优化后,经重叠PCR方法合成串联体A、B的全长基因。分别插入原核表达载体pQE-30,再转化***15[pREP4]感受态细胞中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定。结果与结论:成功设计并构建了两个多表位串联体A、B,并在***中以包涵体形式获得高效表达。Ni-NTA法纯化后分别获得纯度大于92.2%、99%的重组串联体A、B蛋白,并经透析复性法复性。Western印迹和间接ELISA显示纯化、复性后的重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清有特异性结合反应。

主 题 词：肉毒毒素A 多表位串联体 重叠PCR 

学科分类：100405[100405] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2007.03.004

馆 藏 号：203209227...