DOP-PCR法检测单抗残余DNA的探讨

作     者：李萌 武刚 于传飞 王兰 Li Meng;Wu Gang;Yu Chuanfei;Wang Lan

作者机构：中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定与标准化重点实验室北京100050 

基　　金：中国食品药品检定研究院中青年基金资助,课题编号:201482 国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(2014ZX09304311-001) 

出 版 物：《现代科学仪器》 (Modern Scientific Instruments)

年 卷 期：2016年第33卷第5期

页      码：53-58页

摘      要：目的：利用简并引物（Degenerate Oligonucleotide-Primed，DOP）PCR法，建立一种物种非特异性的宿主细胞残余DNA检测方法。方法：设计简并引物，优化实时定量PCR的条件，从而建立DOP--PCR法，检测5种重组单抗药物宿主细胞表达系统（CHO细胞、SP2／0细胞和NS0细胞）的残余DNA。结果：简并引物选择51Tag—N6-ATGTGG 3’，定量PCR条件优化为：低严谨性扩增的退火温度由；32℃以3％的斜率升至72℃，严谨性扩增后的荧光检测条件优化为77℃，30s。3个物种的DNA扩增曲线R2均能达到0．99以上，回收率达到80％～132％，3次测定的ESD均小于25％。同时DOP-PCR与CHO细胞特异性的定量PCR进行比较，二者回收率的均值均在80％～130％之间，3次测定的RSD均小于20％。结论：初步建立了物种非特异性的宿主细胞残余DNA的DOP-PCR检测方法，为单抗药物宿主细胞残余DNA检测提供新思路。

主 题 词：简并引物 实时定量PCR 残余DNA 单抗药物 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203209364...