番茄斑萎病毒NASBA检测方法的建立

作     者：吴兴海 陈长法 封立平 邵秀玲 Wu Xinghai;Chen Changfa;Feng Liping;Shao Xiuling

作者机构：山东出入境检验检疫局青岛266002 

基　　金：山东省科技专项(2011SDH204) 国家质检总局科技计划项目(2012IK281 2013IK173) 

出 版 物：《植物保护学报》 (Journal of Plant Protection)

年 卷 期：2016年第43卷第6期

页      码：900-906页

摘      要：为建立一种快速检测番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的方法,以TSWV-CP1/TSWV-CP2为引物对TSWV的N基因进行PCR扩增及序列测定,在TSWV N基因的高度保守区设计特异性扩增引物NA-P1/NA-P2进行核酸序列依赖性扩增(NASBA)反应,并对NASBA方法的特异性和灵敏度进行验证。结果表明,建立的NASBA方法最佳反应时间为1.5 h。该方法特异性较好,只有TSWV阳性样品中出现了预期大小为235 bp的扩增产物,与烟草环斑病毒(Tobacco ring spot virus,TRSV)、番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow curl virus,ToYCLV)无交叉反应。灵敏度验证中,实时荧光RT-PCR的灵敏度最高,为1.56×10^(-5)ng/μL感病植物RNA模板,NASBA次之,为1.56×10^(-4)ng/μL,普通RT-PCR最低,为1.56×10^(-3)ng/μL。在对9份实际样品检测中,NASBA的阳性检出率与实时荧光RT-PCR、普通RT-PCR相同,均为33%,高于ELISA检测的22%。表明NASBA方法适用于实际样品检测,可对TSWV进行快速检测。

主 题 词：番茄斑萎病毒 核酸序列依赖性扩增 检测 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 

核心收录：

D　O　I：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.06.003

馆 藏 号：203209813...