A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立

作     者：王建华 陈小金 肖妍 王玉玲 谭旭菲 赵丹 张俊哲 陈本龙 王乃福 董志珍 赵祥平 Wang Jianhua;Chen Xiaojin;Xiao Yan;Wang Yuling;Tan Xufei;Zhao Dan;Zhang Junzhe;Chen Benlong;Wang Naifu;Dong Zhizhen;Zhao Xiaoping

作者机构：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心天津300456 

基　　金：天津市科技支撑项目(13ZCZDNCO1300) 天津市滨海新区惠民项目(2013-BK15H013) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2016年第33卷第12期

页      码：85-88页

摘      要：根据A型猪流感病毒(SIV)的基质蛋白(M)编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条Taq Man探针,建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应;该方法对M基因RNA对照(SIV-M-RNA)的最适线性检测范围为3.8×10~1~3.8×10~8拷贝数/反应,标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091,相关系数(R^2)为0.999 8,最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验,每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测,结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性,17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。

主 题 词：A型猪流感病毒 TaqMan探针 荧光RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.12.023

馆 藏 号：203209888...