小鼠Iqcf5基因干扰载体的构建及筛选

作     者：赵秀玲 潘宏 濮黎萍 张鹏飞 王焕景 张明 Zhao Xiuling;Pan Hong;Pu Liping;Zhang Pengfei;Wang Huanjing;Zhang Ming

作者机构：广西大学动物繁殖研究所亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 

基　　金：广西自然科学基金项目桂财教139号资助 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2016年第35卷第11期

页      码：2989-2995页

摘      要：本试验旨在构建4条针对Iqcf5(IQ motif containing F5)基因的sh RNA干扰载体,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后进一步对Iqcf5基因功能的研究奠定基础。提取成年小鼠睾丸组织的RNA,进行反转录,扩增Iqcf5基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体HP362-PBL-PBR-CAG-m Cherry-WPRE上。设计针对Iqcf5基因的sh RNA序列,应用基因重组技术插入到p GPU6/GFP/Neo载体中,将其与Iqcf5基因的真核表达载体共转染293T细胞,进行有效干扰靶点的筛选。构建了Iqcf5基因的真核表达载体和4条针对目的基因Iqcf5的sh RNA,分别是Iqcf5-107、Iqcf5-257、Iqcf5-425和Iqcf5-500和一个阴性对照质粒,经测序鉴定正确,共转染293T细胞,经过筛选Iqcf5-257和Iqcf5-500在293T细胞中对Iqcf5基因表达的干扰效果最佳。成功构建了Iqcf5基因的真核表达载体及其sh RNA干扰载体,并在工具细胞293T中进行了有效干扰靶点的筛选,这为下一步对Iqcf5基因功能的研究奠定了基础。

主 题 词：shRNA 钙调蛋白 RNAi Iqcf5基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13417/j.gab.035.002989

馆 藏 号：203209923...