应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响

作     者：王海燕 葛银林 

作者机构：青岛大学医学院附属医院输血科青岛266003 青岛大学医学院生物化学教研室青岛266021 

基　　金：青岛市科技局科技计划项目(No.07-2-1-7-nsh) 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2009年第25卷第4期

页      码：358-363页

摘      要：为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)对树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA(small interferingRNA,siRNA),采用脂质体转染法以100nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞(siRNA组),以脂质体Lipofectamine2000TM转染MCF-7乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照(对照组),采用ELISA法检测经siRNA干扰VEGF基因后的MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量,Western印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果;以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,用MTT法检测转染前后两组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力,干扰VEGF基因后MCF-7乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高,而CD1a表达下降(P<0.01).转染前后DC诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异(P<0.01).由此可见,siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用.

主 题 词：树突状细胞 血管内皮生长因子 RNA干扰 MCF-7细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 071007[071007] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13865/j.cnki.cjbmb.2009.04.018

馆 藏 号：203209943...