党参CpUGPase基因的克隆、序列分析与原核表达

作     者：李晶 郭琼琼 孙海峰 高建平 LI Jing;GUO Qiong-qiong;SUN Hai-feng;GAO Jian-ping

作者机构：山西医科大学药学院山西太原030001 山西大学化学化工学院山西太原030006 

基　　金：国家自然科学基金项目(81072987) 国家科技支撑计划项目(2011BAI07B07) 山西省高等学校中青年拔尖创新人才支持计划(晋教材146号) 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2016年第47卷第21期

页      码：3876-3883页

摘      要：目的为研究党参多糖代谢途径,从党参Codonopsis pilosula根中克隆多糖代谢关键酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶CpUGPase基因,并进行序列分析和原核表达。方法根据党参转录组中CpUGPase基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增得CpUGPase开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体PET-28a-CpUGPase,转入大肠杆菌BL21(DE3)后,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达。结果 CpUGPase ORF序列全长1 413bp,编码470个氨基酸。序列分析表明,CpUGPase基因具有保守的UGPase_euk催化位点,属于A型糖基转移酶蛋白家族。构建PET-28a-CpUGPase重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约54 900,与预测的蛋白相对分子质量一致。结论从党参根中克隆得到CpUGPase基因,并建立了稳定的原核表达体系,为进一步纯化CpUGPase蛋白,研究其结构和功能奠定了基础。

主 题 词：党参 CpUGPase 基因克隆 序列分析 原核表达 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7501/j.issn.0253-2670.2016.21.021

馆 藏 号：203209981...