Red/ET重组AHBA生物合成基因簇打靶载体的构建与鉴定

作     者：王广林 张会图 张金池 王以光 WANG Guang-lin;ZHANG Hui-tu;ZHANG Jin-chi;WANG Yi-guang

作者机构：南京林业大学森林资源与环境学院江苏南京210039 皖西学院化学与生命科学系安徽六安237012 中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050 

基　　金：国家自然科学基金项目(30570039) 国家"十五"科技攻关项目 

出 版 物：《安徽师范大学学报（自然科学版）》 (Journal of Anhui Normal University(Natural Science))

年 卷 期：2009年第32卷第6期

页      码：569-574页

摘      要：为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根据靶基因A基因下游和P基因上游同源序列设计50 bp引物,中间插入卡那霉素抗性基因的DNA片段,进行PCR,获得外源DNA片段.经过电转化,将外源DNA片段和pKC1139-AOP重组质粒共转入含重组酶质粒大肠杆菌HS996/pSC101-BAD-gba-(Tet).在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与重组质粒pKC1139-AOP上的AHBA基因簇的同源区域重组,构建了AHBA基因簇打靶载体.研究显示了Red/ET重组工作效率高、操作简单、精确的优点,可大大缩短构建打靶载体的时间.

主 题 词：Red/ET重组 AHBA基因簇 打靶载体 链霉菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-2443.2009.06.014

馆 藏 号：203210199...