微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用

作     者：徐华林 赵娟娟 褚风云 郭萌萌 何志旭 陈超 徐林 Xu Hualin Zhao Juanjuan Chu Fengyun Guo Mengmeng He Zhixu Chen Chao Xu Lin

作者机构：遵义医学院免疫学教研室暨贵州省生物治疗人才基地贵州遵义563099 遵义医学院贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室贵州遵义563099 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心贵州贵阳550004 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:31370918) 贵州省高层次创新型人才计划项目(NO:黔科合人才4031) 贵州省应用基础研究计划重大专项(NO:黔科合J重大字2003) 遵义医学院优秀青年人才计划项目(NO:15ZY-001) 

出 版 物：《遵义医学院学报》 (Journal of Zunyi Medical University)

年 卷 期：2016年第39卷第5期

页      码：449-454页

摘      要：目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7（命名为p LV-miR-7）载体体外转染293T细胞进行包装,在48 h收获上清,用Real-time PCR法测定该慢病毒滴度;将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后,用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平;CCK-8法检测95 D细胞生长变化。结果菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA;同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功;慢病毒上清滴度为1.53×10^7copies/mL;该病毒感染人肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制细胞的体外生长（P〈0.05）。结论成功构建miR-7慢病毒过表达载体,为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础。

主 题 词：miR-7 慢病毒载体 肺癌 CCK-8法 95D细胞株 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2016.0105

馆 藏 号：203210231...