Y13F定点突变改良米曲霉中温木聚糖酶的耐热性

作     者：吴芹 胡蝶 李雪晴 袁风娇 李剑芳 邬敏辰 WU Qin;HU Die;LI Xue-qing;YUAN Feng-jiao;LI Jian-fang;WU Min-chen

作者机构：江南大学生物工程学院无锡214122 江南大学食品学院无锡214122 江南大学无锡医学院无锡214122 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31271811) 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2016年第36卷第12期

页      码：36-41页

摘      要：为改良米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶11家族木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其Tyr^(13)(Y13)置换为Phe(F)。基于AoXyn11A与同一家族7种耐热木聚糖酶一级结构的多序列同源比对及其三维结构的同源建模和分子动力学模拟,设计了一种突变酶AoXyn11A^(Y13F);以重组质粒p PIC9K-Aoxyn11A为模板,采用PCR技术将AoXyn11A基因(Aoxyn11A)中编码Y13的密码子TAC突变为F的TTC,构建了一种突变酶基因(Aoxyn11A^(Y13F));分别将Aoxyn11A和Aoxyn11A^(Y13F)在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实施了表达,并对重组表达产物AoXyn11A和AoXyn11A^(Y13F)的耐热性进行了分析。结果表明:突变酶的最适温度T_(opt)由突变前的50℃提高到55℃;AoXyn11A^(Y13F)在50℃的半衰期t_(1/2)^(50)为95 min,较AoXyn11A(t_(1/2)^(50)=6 min)延长了约15倍。由此经Y13F定点突变显著改良了野生型木聚糖酶的耐热性。

主 题 词：定点突变 木聚糖酶耐热性 N端区域 疏水相互作用 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20161206

馆 藏 号：203210254...