衔接蛋白2基因siRNA表达载体的构建及鉴定

作     者：张勇 刘宁 周蔷 李洪岩 刘全 

作者机构：吉林大学基础医学院病理生理学教研室吉林长春130021 吉林大学第一医院心血管内科吉林长春130021 

基　　金：吉林省科技厅白求恩专项基金资助课题(200705122) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2010年第36卷第2期

页      码：331-335页

摘      要：目的:构建针对衔接蛋白2的μ2亚单位(AP2-μ2)的短链干涉RNA(si RNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对AP2-μ2基因的干涉作用。方法:设计AP2-μ2靶向的发夹状si RNA,据此设计合成3条互补的寡核苷酸链,退火后分别连接到pSilencer3.1neo H1载体,转化扩增后进行序列测定。待转染细胞分为对照组、Scramble plasmid、AP2plasmid-1、AP2plasmid-2和AP2plasmid-3组。用脂质体转染法将3组si RNA重组质粒与阴性对照质粒(Scramble plasmid)转染大鼠心肌细胞株H9C2,通过RT-PCR法检测AP2-μ2基因表达水平的变化。结果:合成的6条寡核苷酸单链凝胶电泳显示多个电泳条带,分别退火后,产物经凝胶电泳显示形成单一条带。双链DNA模板与载体质粒连接后,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,凝胶电泳可见4300和66bp的酶切片段。DNA测序连接的核酸序列与设计序列一致,表明AP2-μ2基因的3条si RNA载体构建成功。RT-PCR检测,在AP2plasmid-1组,转染的H9C2细胞中AP2-μ2的基因表达水平较阴性对照组降低约96%。结论:成功地构建了针对AP2-μ2基因的3条si RNA载体,其中AP2plasmid-1转染细胞后可显著抑制AP2-μ2基因表达。

主 题 词：RNA干涉 衔接蛋白2 短链干涉RNA 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13481/j.1671-587x.2010.02.007

馆 藏 号：203210274...