S6K1 shRNA基因重组腺病毒的构建及对基因沉默效果的研究

作     者：李树颖 于德民 牛文彦 姚智 YU De-min;MIU Wen-yan;YAO Zhi

作者机构：天津医科大学代谢病医院、卫生部激素与发育重点实验室300070 天津医科大学基础医学院免疫学教研室300022 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30570912) 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2010年第30卷第5期

页      码：405-409页

摘      要：目的 构建S6K1 shRNA基因重组腺病毒（S6K1Ax）并在细胞及小鼠肝脏验证对S6K1基因的沉默效果.方法 设计3种S6K1 shRNA序列,通过在pcPUR质粒与pcDNA3.1质粒、cosmid质粒之间的拼接将S6K1 shRNA转染进腺病毒,筛选沉默效果最佳的S6K1Ax并在293细胞扩增纯化得到高效价的S6K1Ax.感染来源于小鼠的肝脏、肌肉、脂肪细胞系,在Western blot水平评价其对S6K1蛋白表达的抑制效果.将S6K1Ax注射进C57BL/6J小鼠尾静脉,6 d后处死小鼠取肝脏,逆转录-聚合酶链反应和Western blot观察小鼠肝脏S6K1在mRNA和蛋白水平的表达.检测注射S6K1Ax前后小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）变化.结果 Western blot证实制备的S6K1 Ax可抑制来源于小鼠的肝脏、肌肉、脂肪3种细胞系和小鼠C57BL/6J肝脏S6K1的蛋白表达.小鼠肝脏S6K1 mRNA结果显示：对照组为1.39±0.21,实验组为0.63±0.09,t=6.132,P〈0.01,差异有统计学意义.S6K1Ax注射小鼠,ALT水平注射前为（15.15±4.43）U/L,注射后为（17.32±4.22）U/L,t=1.451,P〉0.05,差异没有统计学意义.结论 构建的S6K1Ax可将来源于小鼠的细胞系及C57BL/6J小鼠肝脏S6K1基因沉默,为研究S6K1的基因功能提供了适合的实验工具.

主 题 词：S6K1 shRNA 腺病毒载体 基因沉默 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2010.05.004

馆 藏 号：203210389...