过表达及干扰人APE1重组腺病毒载体的构建与鉴定

作     者：郭润民 吴子君 黄瑞娜 王志强 姜佳美 刘畅 梁国标 陈科辉 李腾 李上海 莫海亮 闫海 何松坚 游琼 吴铿 

作者机构：广东医科大学附属医院心血管内科广东湛江524001 广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东湛江524001 广东医科大学临床医学研究中心广东湛江524001 

基　　金：国家自然科学基金(No.81670348) 广东省医学科学技术研究基金(No.A2016143) 广东省自然科学基金(No.2016A030313678 2015A030310359 2016A030310359) 湛江市科技计划项目(No.2014A01033 2015C01006) 广东医学院附属医院博士基金(No.BJ201511) 

出 版 物：《广东医学院学报》 (Journal of Guangdong Medical College)

年 卷 期：2016年第34卷第5期

页      码：463-466页

摘      要：目的构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒。方法应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定。用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒p BHGdelta E1lox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达。结果基因测序显示APE1过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293A细胞包装成功。APE1过表达和shRNA腺病毒明显影响人AC16心肌细胞中APE1蛋白表达水平。结论成功构建了人APE1过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体。

主 题 词：脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 RNA干扰 AC16心肌细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4057.2016.05.007

馆 藏 号：203210438...