转化生长因子β1及基质金属蛋白酶抑制剂1、2siRNA真核表达载体的构建与鉴定

作     者：钱克莉 徐宁 郎清 戚敬虎 孙银春 肖朗 刘杞 石小枫 QIAN Ke-li;XU Ning;LANG Qing;QI Jing-hu;SUN Yin-chun;XIAO Lang;LIU Qi;SHI Xiao-feng

作者机构：重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室400010 陕西省榆林市第二医院重症医学科 

基　　金：国家自然科学基金(30671867) 

出 版 物：《中华肝脏病杂志》 (Chinese Journal of Hepatology)

年 卷 期：2011年第19卷第4期

页      码：291-296页

摘      要：目的 用RNA干扰技术,分别以转化生长因子（TGF）β 1、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1和TIMP-2为靶基因,设计并构建针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并在体外检测其对大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）的TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因表达的抑制情况.方法 设计合成TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2的siRNA并与含绿色荧光蛋白的pGenesil-1载体连接,构建siRNA真核表达载体,并测序鉴定.体外转染HSC-T6细胞,观察转染效率,并用荧光定量PCR以及Western blot分析对目的 基因的抑制效率.组间比较用方差分析,两两比较用q检验.结果 成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体.体外成功转染HSC-T6细胞,转染后的细胞TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达分别下调63.4%±8.0%,64.5%±9.0%,55.0%±17.0%（F值分别为17.55、128.42、210.36,P值均＜0.01）,TGF β 1、TIMP-1及TIMP-2蛋白表达分别下降57.8%±3.0%,55.1%±5.0%,49.3%±1.0%（F值分别为130.75、159.09、35.72,P值均＜0.01）.结论 成功构建了针对TGF β 1、TIMP-1和TIMP-2基因的siRNA真核表达载体;将重组载体成功转染入体外培养的HSC-T6细胞,并显著抑制了目的 基因的表达;为进一步研究其在体抑制表达提供了实验工具.

主 题 词：肝硬化 转化生长因子β 肝星状细胞 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 1002[医学-临床医学类] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2011.04.014

馆 藏 号：203210749...