过表达MEG3慢病毒载体构建及其对骨髓瘤细胞系XG-7凋亡的影响

作     者：张怡堃 王华 肖凤君 张晓艳 刘佩林 时全星 殷召 雷琰 王立生 

作者机构：解放军第306医院血液科北京100101 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2015AA80310085G) 中国博士后基金项目(5492013M542445) 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2016年第24卷第6期

页      码：1793-1800页

摘      要：目的：构建过表达母系表达印记基因MEG3（materally expressed gene 3,MEG3）全长的慢病毒载体,观察其对骨髓瘤细胞凋亡的影响。方法：以包含MEG3全长的包装质粒pcDNA3.0-MEG3为模板,设计针对MEG3全长的引物（寡核苷酸片段）,经PCR扩增后获得MEG3全长,并将其亚克隆入线性化的慢病毒表达载体pCDH-EF1-copGFP中,经双酶切、PCR及测序等方法鉴定。利用脂质体转染试剂将鉴定正确的pCDH-EF1-MEG3-copGFP重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过荧光显微镜和流式细胞术检测GFP表达效率,real-time PCR检测MEG3mRNA表达水平。通过三质粒共转染及PEG纯化的方法获得慢病毒,以优化感染滴度感染骨髓瘤细胞系,通过流式细胞术检测过表达MEG3对细胞凋亡的影响。结果：经酶切、PCR及测序等方法证实成功构建pCDH-EF1-MEG3-copGFP过表达载体;通过流式细胞术测定制备的慢病毒滴度为1.86×10^8pfu/ml;流式细胞术检测和realtime PCR方法证实MEG3在293T细胞和骨髓瘤细胞中表达明显上调;流式细胞术检测证实过表达MEG3可诱导骨髓瘤细胞凋亡。结论：成功构建并制备过表达MEG3的慢病毒过表达载体pCDH-EF1-MEG3-copGFP,该载体能高效过表达MEG3并诱导骨髓瘤细胞凋亡,进一步证实了MEG3具有抑癌功能,为进一步研究MEG3调控骨髓瘤细胞生物学特性及机制奠定了基础。

主 题 词：母系表达印记基因 骨髓瘤细胞XG-T 细胞凋亡 慢病毒载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7534/j.issn.1009-2137.2016.06.032

馆 藏 号：203211137...