SET8在肾透明细胞癌中的表达及其对786-O细胞增殖迁移能力的影响

作     者：徐金升 王静 张俊霞 白亚玲 崔立文 张慧然 张胜雷 Xu Jinsheng Wang Jing Zhang Junxia Bai Yaling Cui Liwen Zhang Huiran Zhang Shenglei.

作者机构：河北医科大学第四医院肾内科石家庄050011 

基　　金：河北省自然科学基金资助项目(H2012206157) 

出 版 物：《中华泌尿外科杂志》 (Chinese Journal of Urology)

年 卷 期：2016年第37卷第11期

页      码：860-865页

摘      要：目的 探讨SET8在肾透明细胞癌组织中表达的临床意义及沉默该基因对人肾透明细胞癌786-O细胞增殖迁移能力的影响.方法 收集2006年12月至2011年12月156例肾切除术后标本,病理类型均为肾透明细胞癌.采用免疫组化染色法检测SET8蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达,分析SET8蛋白表达与患者临床病理特征的关系.体外培养肾透明细胞癌786-O细胞,针对人SET8基因设计合成4对候选短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）序列（shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4）,以脂质体Lipofectamine 2000为载体,转染肾透明细胞癌786-O细胞,荧光显微镜下观察转染效率.蛋白质印迹法检测786-O细胞中SET8蛋白的表达,筛选有效shRNA序列.将有效shRNA序列转染786-O细胞,细胞分3组：SET8-shRNA转染组（转染SET8-shRNA）、阴性对照组（转染阴性对照shRNA）、正常对照组（未转染组）.对转染后的786-O细胞采用MTT法检测增殖能力;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力.结果 SET8蛋白在肾透明细胞癌组织中阳性表达率为98.7％（154/156）,SET8蛋白高表达率为60.3％（94/156）,SET8蛋白表达高低与肾透明细胞癌患者的肿瘤分期、肿瘤大小及淋巴结转移有关（P均＜ 0.05）;在SET8-shRNA浓度为2μg/L、Lipofectamine 2000为4μl/孔的转染条件下,转染效率约70％;筛选出的最佳干扰序列为SET8-shRNA2,转染48 h沉默效率可达64％.SET8-shRNA2转染组SET8蛋白表达率在转染后48 h显著低于阴性对照组、正常对照组（t=-38.174,P＜0.01;t=-58.766,P＜0.01）.shRNA有效沉默SET8基因表达后,SET8-shRNA转染组786-O细胞增殖、克隆形成和迁移能力均受到显著抑制.结论 SET8蛋白在肾透明细胞癌组织中表达升高可能促进了肿瘤的发生、发展.沉默SET8蛋白表达可有效抑制肾透明细胞癌786-O细胞的肿瘤恶性生物学行为.

主 题 词：赖氨酸甲基转移酶SET8 肾透明细胞癌 786-O细胞 细胞增殖 克隆形成 迁移 Lysine methyltransferaseSET8 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1000-6702.2016.11.018

馆 藏 号：203211263...