正交设计优化南方根结线虫RAPD-PCR体系

作     者：吴篆芳 曹坳程 郭美霞 王秋霞 李园 颜冬冬 毛连纲 马涛涛 Wu Zhuangfang;Cao Aocheng;Guo Meixia;Wang Qiuxia;Li Yuan;Yan Dongdong;Mao Liangang;Ma Taotao

作者机构：中国农业科学院植物保护研究所/农业部农药化学与应用重点实验室北京100193 

基　　金：现代农业产业技术体系北京市创新团队基金 

出 版 物：《中国植保导刊》 (China Plant Protection)

年 卷 期：2012年第32卷第10期

页      码：5-10页

摘      要：以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)DNA为模板,对影响南方根结线虫RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立南方根结线虫RAPD-PCR反应最佳体系。应用L16(45)正交设计研究了Taq酶、10×PCR buffer、dNTP、primer、模板DNA对扩增反应的影响。结果表明,南方根结线虫RAPD-PCR优化体系为20μL体系中含模板3μL、10μmol/L引物1.5μL、10×反应缓冲液2.5μL、2.5 mmol dNTP mixture 2.4μL、Taq DNA聚合酶0.4μL。在此基础上筛选出扩增稳定、多态性丰富的RAPD引物,并通过梯度PCR试验,确定了引物最佳退火温度。该优化RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于南方根结线虫不同居群间亲缘关系和遗传多样性的分析。

主 题 词：南方根结线虫 RAPD-PCR 正交设计 条件优化 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-6820.2012.10.001

馆 藏 号：203211530...