珠子参ISSR-PCR反应体系的建立及优化

作     者：宋小妹 许苗苗 刘银环 王薇 刘超 杨新杰 崔九成 SONG Xiaomei;XU Miaomiao;LIU Yinhuan;WANG Wei;LIU Chao;YANG Xinjie;CUI Jiucheng

作者机构：陕西中医学院咸阳712046 

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:81102805/H2804) 陕西省科技统筹创新工程项目(编号:2011KTCQ03-02) 陕西省科学技术研究发展计划项目(编号:2011K16-02-02) 陕西省教育厅项目(2010JK502) 陕西省中医管理局专项科研计划项目(编号:ZY08) 

出 版 物：《西北药学杂志》 (Northwest Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2014年第29卷第6期

页      码：551-554页

摘      要：目的：建立珠子参的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序，为其深入研究奠定基础。方法采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取珠子参总DNA ，并用正交设计实验对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。结果提取的基因组DNA纯度和完整性较好，A260/A280值在1．8～2．0之间，DNA无降解现象，可满足ISSR-PCR扩增要求。珠子参ISSR分析的最适反应体系为：在20μL PCR反应体积中，含10 ng模板DNA、0．20 mmol·L -1 dNTPs、1．5μmol·L -1引物、3U TaqDNA 聚合酶、2μL 10× PCR Buffer、3 mmol·L -1 Mg2＋。扩增程序为：95℃预变性5 min ，94℃变性30s，58℃退火30 min ，72℃延伸1 min ，循环40次，72℃延伸10 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。结论建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究珠子参的遗传变异和遗传多样性。

主 题 词：珠子参 基因组DNA ISSR反应体系 遗传多样性 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-2407.2014.06.001

馆 藏 号：203212571...