口腔幽门螺杆菌基因定量测定方法的建立及其应用评价

作     者：别明江 严谨 王保宁 谢艳 祝捷 王馨田 王红仁 李明远 杨靖 李尤玲 

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院四川成都610041 四川大学华西医院消化内科四川成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司四川成都610041 成都树德中学四川成都610031 湖北医药学院附属人民医院感染性疾病科湖北十堰442000 十堰巿人民医院中西结合科湖北十堰442000 

基　　金：四川省科技厅应用基础研究项目(2014JY0201) 湖北医药学院研究生启动金资助计划项目(2015QDJZR08) 十堰市科技局研究与开发专项基金项目(16K70) 成都市科技局重点科研项目(2014-CP02-00079-GX) 

出 版 物：《西部医学》 (Medical Journal of West China)

年 卷 期：2017年第29卷第1期

页      码：17-21页

摘      要：目的建立一种通过口腔唾液的特异、灵敏测定幽门螺杆菌核酸DNA的荧光定量PCR方法,并对其进行临床比对评价,为快速、准确、无创检测幽门螺杆菌感染提供新方法。方法以高度保守的幽门螺杆菌16srRNA序列为靶序列设计引物,经Blast软件对相似序列比对后,筛选出一对最优并与常见胃肠道细菌无交叉反应的引物;用荧光定量PCR扩增,对引物的退火温度及反应体系进行优化,确立反应条件;用已知菌落数(CFU/ml)的幽门螺杆菌菌悬液与唾液混合,梯度稀释扩增测试后进行灵敏度分析,建立幽门螺杆菌菌落数(CFU/ml)和荧光定量PCR循环数(Ct)关系的标准曲线;用乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌的基因进行特异性分析;利用此方法对150例来自临床胃镜中心的已完成尿素酶(URT)测定,并自愿参加研究者的口腔唾液标本进行收集检测,结果与同一病人的14 C呼气实验检测结果进行比对分析,计算阳性率、阴性率和符合率。结果本检测方法的引物退火温度是62℃,反应体系10μl;对幽门螺杆菌的检测敏感度为102 CFU/ml;本检查与乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌无交叉反应;本方法与14 C呼气实验检测结果比较灵敏度74.12%,特异度86.15%,符合率79.33%,Kappa值为0.59。结论建立了口腔唾液幽门螺杆菌基因检测的分子诊断方法;该方法的特异性好,灵敏度高,为临床检测口腔幽门螺杆菌提供了一个无创、方便的新方法。

主 题 词：唾液 幽门螺杆菌 基因 定量检测 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-3511.2017.01.004

馆 藏 号：203215428...