山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

作     者：王咪 李文良 郝飞 毛立 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 WANG Mi;LI Wen-liang;HAO Fei;MAO Li;YANG Lei-lei;ZHANG Wen-wen;JIANG Jie-yuan

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 南京农业大学动物医学院南京210095 

基　　金：江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(14)2090] "十三五"国家重点研发计划(2016YFD0500900) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2017年第48卷第1期

页      码：150-156页

摘      要：山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达重组N蛋白并鉴定。通过条件优化建立ELISA抗体检测方法,并检测临床样品与HI试验进行比较。本试验成功构建重组质粒,诱导表达的蛋白质(47ku)经SDS-PAGE与Western blot鉴定,证明其正确表达且具有良好的抗原性与特异性。利用纯化的蛋白质作为包被抗原优化间接ELISA反应条件,确定其最佳抗原包被浓度为1μg·mL-1、血清稀释度为1∶200、血清作用时间60min、酶标二抗工作浓度为1∶6 000、二抗反应时间30min、底物显色时间10min。通过对138份临床血清样品检测发现其与HI试验结果符合率达88.41%。本研究建立的间接ELISA检测方法敏感、特异、准确,适用于临床样品的检测与血清流行病学调查。

主 题 词：山羊副流感病毒3型 N蛋白 原核表达 间接ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2017.01.018

馆 藏 号：203215862...