内弯宫脂线虫环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立

作     者：乔艳 周前进 李孝军 陈炯 QIAO Yan ZHOU Qian-Jin LI Xiao-Jun CHEN Jiong

作者机构：宁波大学生物技术系浙江宁波315211 舟山出入境检验检疫局浙江舟山316000 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA020101) 浙江省自然科学基金项目(LY14C180002) 浙江省科技计划项目(2012C32016) 宁波市科技创新团队项目(2015C110018) 宁波市科技富民项目(2016C10042) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第39卷第2期

页      码：137-142页

摘      要：为建立内弯宫脂线虫(***)的LAMP-LFD快速检测技术,本研究将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)的检测方法结合,以内弯宫脂线虫核糖体DNA(r DNA)的内转录间隔区(ITS)序列为检测靶标,设计了3对特异性引物(其中上游内引物由生物素标记)进行LAMP扩增反应,产物与经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针杂交,在LFD上完成结果显示。结果表明,LAMP-LFD方法能够特异性地检测内弯宫脂线虫,对简单异尖线虫等8种其它常见鱼类寄生蠕虫检测呈阴性。对含有内弯宫脂线虫r DNA-ITS2序列的重组质粒的检测灵敏度为1.4×10~2拷贝/μL,为常规PCR检测方法的100倍;对内弯宫脂线虫第三期幼虫,单虫检测灵敏度为单条虫体基因组DNA的10-6倍。优化后LAMP检测时程仅40 min。对实际样品的检测结果表明,LAMP-LFD方法检测内弯宫脂线虫与PCR结合测序方法获得的结果一致。因此,利用LAMP-LFD能够特异、灵敏、高效地检测出内弯宫脂线虫,具有在该线虫的检验检疫中良好的应用前景。

主 题 词：内弯宫脂线虫 环介导等温扩增 横向流动试纸条 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0425.2017.02.13

馆 藏 号：203216165...