骨形态发生蛋白10在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及其生物活性

作     者：郑雄飞 金坚 龚笑海 李文军 徐栋生 万爱妮 ZHENG Xiong-fei JIN Jian GONTG Xiao-mei LI Wen-jun XU Dong-sheng WAN Ai-ni

作者机构：江南大学药物设计与分子药理研究室江苏无锡214122 江南大学药学院江苏无锡214122 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2017年第30卷第3期

页      码：243-248页

摘      要：目的在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达改造后的骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)全长基因,纯化后检测其生物活性,以期获得具有生物活性的BMP10分子。方法于rh BMP10的propeptide与mature chain基因片段之间插入6×his-tag标签及DDDDK(肠激酶识别位点),构建p MH3-rh BMP10-histag-DDDDK质粒,电转入CHO细胞,用500μg/ml G418从单克隆中筛选出稳定表达目的蛋白的重组细胞,悬浮驯化表达8 d后,收集培养液上清,阴离子交换柱和镍柱纯化目的蛋白。采用q-PCR法检测纯化蛋白的体外细胞活性。结果目的蛋白纯化液经SDS-PAGE检测到的条带相对分子质量与目的蛋白理论值相符,Western blot分析可见相对分子质量约48 000、96 000和190 000的3个条带,与目的蛋白单体及多聚体相对分子质量一致。酶切后的目的蛋白可有效刺激P19细胞的标志蛋白(Smad6)表达上调。结论 BMP10 propeptide的存在对BMP10的蛋白活性具有重要作用,改造后的BMP10在CHO细胞中表达具有一定的生物活性。本研究为全长BMP10活性二聚体的制备提供了新的思路。

主 题 词：骨形态发生蛋白10 中国仓鼠卵巢细胞 离子交换柱 肠激酶 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.001677

馆 藏 号：203216311...