雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究

作     者：纪海兵 刘中美 郭军玲 周哲敏 JI Hai-bing;LIU Zhong-mei;GUO Jun-ling;ZHOU Zhe-min

作者机构：江南大学生物工程学院江苏无锡214122 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31400078) 江苏省产学研联合创新资金-前瞻性联合研究项目(BY2014023-21) 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2017年第33卷第1期

页      码：81-86,80页

摘      要：本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质。本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001)。以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3’与5’端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557 bp,编码518 aa。将其酶原(pro CPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达pro CPY,产量为151.20±10.20mg/L。通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y。成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0~7.0下都有较高的稳定性。本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础。

主 题 词：雅致放射毛霉 羧肽酶Y 酶学性质 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.1.013

馆 藏 号：203216395...