TaqMan—MGB实时荧光定量PCR检测RIG—G基因方法的建立及其方法学验证

作     者：庞丽 权文强 吴军录 姚懿雯 李冬 Pang Li;Quan Wenqiang;Wu Junlu;Yao Yiwen;Li Dong

作者机构：同济大学附属同济医院检验科上海200065 

基　　金：国家自然科学基金(81272603,81472179) 上海申康医院发展中心课题(SHDC22014008) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2016年第39卷第12期

页      码：936-940页

摘      要：目的：建立一种以TaqMan－MGB荧光探针为特点，检测人类急性早幼粒细胞白血病（ M3型）中维甲酸诱导基因G（ RIG－G）的实时荧光定量聚合酶链反应（ RT－qPCR）方法，并运用该方法对正常人、M3患者外周血中的RIG－G表达水平进行分析，探讨其在M3诊断中的价值。方法方法学建立。针对人RIG－G基因设计特异性引物和TaqMan－MGB荧光探针，以逆转录的互补DNA为模板，建立TaqMan－MGB实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线；在方法特异性、正确度、精密度、分析灵敏度、干扰物质等各方面对检测方法的性能进行评估，并用该法验证20例M3患者外周血与骨髓中RIG－G表达水平相关性，同时检测40份正常人及20份M3患者标本，t检验比较两组外周血RIG－G水平，用ROC曲线分析其对M3的检测效能。结果 RIG－G标准品拷贝数log值与循环阈值数（ Ct ）的标准曲线方程为：Y＝－3．539X＋42．952，R^2＝0．999，呈良好的线性关系。用建立的实时荧光定量PCR方法检测标准品，结果与已知值比较，相关性系数r＝0．999，计算偏倚值均＜5％；分别选取高值（107拷贝／μl）、中值（104拷贝／μl）、低值（10^1拷贝／μl）3个浓度，批内CV分别为1．38％、2．31％、7．56％；批间CV分别为0．71％、1．17％、5．07％，均＜10％；该方法的分析灵敏度为101拷贝／μl。 M3患者外周血与骨髓中RIG－G表达水平相关系数为r＝0．996，斜率b＝0．973，结果相关性良好，t＝0．099，P＞0．05，显示两组标本检测结果差异无统计学意义。40份正常健康体检外周血RIG－G基因的拷贝数[3．62×10^4（1．61×10^4～4．90×10^4）拷贝／μl]与M3患者[7．10×10^2（5．43×10^2～2．21×10^3）拷贝／μl]差异有统计学意义（U＝18，P＜0．001）。结论成功建立了检测人外周血RIG－G基因的TaqMan－MGB荧光实时定量PCR方法。该法具有较好的正确度、精密度、灵敏度及特异性，能够为临床M3患者的早期诊断及治疗监测提供必要帮助。

主 题 词：实时聚合酶链反应 细胞内信号肽和蛋白质类 白血病,早幼粒细胞,急性 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.12.014

馆 藏 号：203216492...