ShRNA靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖和凋亡的影响

作     者：张艳君 贾秀红 李建厂 徐酉华 

作者机构：滨州医学院附属医院儿科山东滨州256603 重庆医科大学儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室重庆400014 

基　　金：山东省科学技术发展计划项目(No.2010GSF10264) 

出 版 物：《中国当代儿科杂志》 (Chinese Journal of Contemporary Pediatrics)

年 卷 期：2012年第14卷第10期

页      码：785-791页

摘      要：目的探讨慢病毒载体介导短发夹RNA(shRNA,siRNA前体)靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖、凋亡和形态的影响。方法设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10基因的过表达质粒,将4条干扰质粒分别和过表达质粒共转染293T细胞,用Western blot检测出敲减效果最好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10);将U937细胞分为干扰组(lenti-shHOXA10)、阴性对照组(lenti-NC)和未处理组,通过流式细胞仪测定慢病毒对U937细胞的感染效率并用real-time PCR、Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用;瑞氏染色观察3组细胞形态上的变化;MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体。干扰组HOXA10 mRNA的沉默效率为(92.3±1.3)%,蛋白表达水平下降91.1%,干扰组细胞抑制率为(43.9±0.7)%,与阴性对照组、未处理组相比差异有统计学意义(P<0.05);瑞氏染色显示干扰组细胞核质比减小、核分裂相少见;干扰组细胞凋亡率为(27.1±1.4)%,显著高于阴性对照组的(19.4±1.9)%和未处理组的(5.5±1.3)%(P<0.05)。结论慢病毒载体介导的shRNA可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡,HOXA10基因有望成为白血病基因治疗的新靶点。

主 题 词：HOXA10基因 白血病 慢病毒 RNA干扰 U937细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203217136...