重组TRX-BNP融合蛋白的构建和表达

作     者：游晓华 秦永文 黄盛东 袁扬 龚德军 

作者机构：第二军医大学长海医院心血管内科上海200433 长海医院胸心外科 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2006年第27卷第6期

页      码：679-681页

摘      要：目的:构建人B型钠尿肽(BNP)表达质粒,用pET原核表达系统制备重组抗原TRX-BNP融合蛋白。方法:根据GenBank中检索到的人BNP成熟蛋白序列编码,设计合成编码BNP-32蛋白的DNA,并分别在5′端和3′端设计EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点,经聚合酶链反应(PCR)、构建重组质粒***,并在BL21(DE3)经IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析制备TRX-BNP。通过DNA测序、融合蛋白的相对分子质量分析及Western印迹来鉴定TRX-BNP质粒及表达的BNP抗原的正确性。结果:DNA测序结果表明,所获得的BNP基因编码序列符合序列设计的要求,正确插入设计位点,重组质粒***构建成功。IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示有特异性蛋白TRX-BNP表达,蛋白相对分子质量21 400,Ni-NTA亲和纯化,在UVP凝胶成像分析系统上作定量分析,BNP蛋白纯度达到95%。Western印迹结果证实TRX-BNP蛋白特异性表达。结论:成功制备TRX-BNP融合蛋白。

主 题 词：B型钠尿肽 融合蛋白 硫氧还蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0258-879X.2006.06.026

馆 藏 号：203217149...