猪德尔塔冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：郑丽 王利丽 路超 杨春蕾 李富强 张莉 鄢明华 ZHENG Li;WANG Li-li;LU Chao;YANG Chun-lei;LI Fu-qiang;ZHANG Li;YAN Ming-hua

作者机构：天津市畜牧兽医研究所天津300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津300381 

基　　金：天津市农业科技转化与推广项目(201301030) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2017年第47卷第3期

页      码：334-340页

摘      要：为建立一种能够快速、准确检测猪德尔塔冠状病毒(PD Co V)的方法,根据G en Bank上已发表的PDCo V的M基因序列,设计并合成1对特异性引物,扩增的目的基因片段的大小为359 bp。通过优化反应条件,建立了检测PDCo V的RT-PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性进行了检测。结果显示,仅PDCo V阳性模板可扩增得到约359 bp的目的条带,而猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪链球菌2型、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,该方法能检测到的最低核酸质量浓度为1 ng/L。应用该方法对110份临床疑似发病的腹泻猪样品进行检测,结果检出13份PDCo V阳性,阳性检出率为11.8%。应用Blast对测序结果进行比较分析,结果表明检测的阳性样品与其他PDCo V序列的同源性为92.2%~100%。M基因的系统进化分析表明,阳性样品与PDCo V中国分离株的亲缘关系较近。以上结果表明,本研究成功建立了PDCo V的RT-PCR方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于PDCo V的临床诊断及流行病学监测。

主 题 词：猪德尔塔冠状病毒 RT-PCR 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.03.010

馆 藏 号：203217987...