NFAT5基因报告载体的构建及其与miR-155关系的实验研究

作     者：舒彬 李文婷 刘真 张亚洁 尹斌 赵盼 张同威 贾赤宇 Shu Bin;Li Wenting;Liu Zhen;Zhang Yajie;Yin Bin;Zhao Pan;Zhang Tongwei;Jia Chiyu

作者机构：河北北方学院研究生部河北张家口075000 解放军第三0九医院烧伤整形科北京100091 

基　　金：国家自然科学基金面上资助项目(81372051,81670009) 总参军事医学和老年病科研基金项目(ZCWS14B06) 解放军309医院院管课题(2014MS-001) 北京市科技计划“首都特色”专项基金资助项目(Z151100004015199) 全军医学科技青年培育项目(15QNP049) 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2017年第46卷第8期

页      码：1009-1011,1014页

摘      要：目的通过生物信息软件预测出miR-155的靶基因,构建miR-155靶基因荧光素酶基因报告载体,验证其与miR-155的对应关系。方法以数据库miR Base为依据,对miR-155进行生物信息学分析,通过Target Scan、Mir Base、Pic Tar三大软件预测miR-155的靶基因;将设计合成的T淋巴细胞核因子5(NFAT5)及其突变序列NFAT5-mu序列分别克隆至荧光素酶报告质粒pMIR-REPORT^(TM) Luciferace;将第4代人胚胎肾293AD(HEK-293AD)细胞按随机数字表法分为4组:miR-155mimics+pMIR-NFAT5组、miR-155 mimics+pMIR-NFAT5-mu组、miR-155inhibitor+pMIR-NFAT5组、miR155 Negative control+pMIR-NFAT5组与对照质粒(pRL-TK)共转染24h后用双荧光素酶检测试剂盒测定相对荧光素酶活性。结果 Mirbase、TargetScan、PicTar预测交叉结果显示,NFAT5基因3′UTR与miR-155存在结合互补位点;构建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu重组质粒经酶切及测序鉴定正确;双荧光素酶报告基因检测系统显示:pMIR-NFAT5+miR155 mimics组较pMIR-NFAT5+miR-control组荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功构建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu荧光素酶报告基因重组质粒;证实miR-155对NFAT5基因mRNA 3′-UTR具有靶向调控作用,为下一步研究miR-155在吸入性肺损伤机制中的作用提供前期实验室数据和方法。

主 题 词：T淋巴细胞核因子5 miR-155 荧光素酶基因报告载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2017.08.001

馆 藏 号：203218058...