慢病毒介导siRNA抑制1型鸭肝炎病毒复制

作     者：王永娟 董亚青 朱善元 王安平 洪伟鸣 吴双 左伟勇 WANG Yong-juan;DONG Ya-qing;ZHU Shan-yuan;WANG An-ping;HONG Wei-ming;WU Shuang;ZUO Wei-yong

作者机构：江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室泰州225300 

基　　金：2016年度江苏省高校自然科学研究面上资助项目(16KJB230004) 江苏省“六大人才高峰”第十二批培养对象资助项目(NY-023,10410015002) 江苏省大学生创新创业训练计划校企合作基金项目(201612806030H) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2017年第48卷第3期

页      码：522-529页

摘      要：为筛选能抑制DHAV-1复制的siRNA,探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防治中的应用,采用PCR法扩增DHAV-1 RdRp基因,并构建pEGFP-RdRp融合表达EGFP-RdRp蛋白;根据RdRp的序列测定结果,设计3条RdRp特异siRNA,并合成相应shRNA分别插入pmiRZipΔ中构建pRdRp-shRNA;共转染pRdRp-shRNA和pEGFP-RdRp于HEK-293T细胞,通过荧光显微镜法、流式细胞术、相对荧光定量PCR法筛选抑制效率较高的siRNA;将高效siRNA用于病毒载体pmiRZip介导的慢病毒制备;通过计算重组慢病毒转导、DHAV-1感染的鸭胚胎成纤维细胞中病毒TCID50和RdRp基因表达量确定siRNA对病毒及病毒基因的抑制作用。结果显示,3个siRNA均能抑制RdRp基因的表达,包含GDD模体的shRNA2的抑制率最高,对应重组病毒能使DHAV-1的TCID50下降6.2lg,RdRp基因转录量下降89.6%,抑制时间至少达120h,为鸭病毒性肝炎临床防治提供了新思路。

主 题 词：鸭病毒性肝炎 GDD模体 RdRp RNA干扰 siRNA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2017.03.016

馆 藏 号：203218123...