DEC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其稳转胶质瘤细胞系的建立

作     者：魏学辉 李晓明 张耀 茹懿 王秦豪 李霞 林伟 WEI Xuehui LI Xiaoming ZHANG Yao RU Yi WANG Qinhao LI Xia LIN Wei

作者机构：第四军医大学西京医院神经外科陕西西安710032 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81572469) 

出 版 物：《中华神经外科疾病研究杂志》 (Chinese Journal of Neurosurgical Disease Research)

年 卷 期：2017年第16卷第1期

页      码：15-19页

摘      要：目的构建人分化型胚胎软骨发育基因1(DEC1)的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并建立稳定敲减DEC1表达的人脑胶质瘤细胞株T98G。方法根据Gen Bank中DEC1基因c DNA序列设计合成两条特异性shRNA序列,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,分别克隆到PsiLVRU6MP质粒载体内,经酶切电泳、DNA测序鉴定后包装成慢病毒颗粒。再以3组慢病毒感染胶质瘤细胞系T98G,用嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察m Cherry的表达,Western Blot检测各组DEC1蛋白的表达水平。结果 DEC1基因shRNA慢病毒表达载体经酶切、测序鉴定证实克隆正确。荧光显微镜检测显示各组细胞均已被慢病毒高效感染。Western Blot结果显示,两干扰组细胞各自DEC1蛋白表达水平明显低于未处理组和阴性对照组,分别占未处理组的39.47%±0.69%和41.17%±0.89%(P0.05);阴性对照组与未处理组相比亦无明显差异(P>0.05)。结论成功构建DEC1基因shRNA慢病毒表达载体,感染胶质瘤T98G细胞系获得成功。两干扰组慢病毒均能明显敲减目的基因DEC1的表达,为进一步研究DEC1在胶质瘤细胞系T98G中的生物学功能和作用机制提供了实验基础。

主 题 词：分化型胚胎软骨发育基因1 短发卡RNA 慢病毒表达载体 胶质瘤 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203218661...