利用CRISPR/Cas9技术敲除小鼠ES细胞H2-K1基因

作     者：陈瑞俊 李蔚然 黄乙涓 刘建中 李亮平 CHEN Ruijun LI Weiran HUANG Yijun LIU Jianzhong LI Liangping

作者机构：中山大学中山医学院生物学教研室广东广州510080 暨南大学附属第一医院临床医学研究院广东广州510632 

基　　金：国家自然科学基金(31270920 81472824) 广东省科技计划项目(2013B060300004) 

出 版 物：《中山大学学报（自然科学版）》 (Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni)

年 卷 期：2017年第56卷第2期

页      码：5-12页

摘      要：利用CRISPR/Cas9和ES细胞技术,在小鼠ES细胞株上敲除小鼠H2-K1基因,为研发MHCⅠ类基因人源化小鼠打下基础。设计了两个单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),分别靶向H2-K1基因的外显子2和外显子3。以p X330质粒为骨架构建表达sgRNA的打靶载体。用电穿孔转染法将构建好的质粒以及p SUPER-puro共同导入小鼠ES细胞中,实现基因敲除。在嘌呤霉素筛选后,利用PCR初步检测靶基因的敲除情况,再通过测序以及流式细胞分析确定敲除H2-K1基因的小鼠ES细胞。结果显示:利用CRISPR/Cas9技术,小鼠ES细胞的H2-K1基因被成功敲除,通过PCR检测到4个克隆为H2-K1单等位基因敲除(19.0%),2个克隆为H2-K1双等位基因敲除(9.5%)。经过测序以及流式细胞分析,2株小鼠ES细胞被确认为H2-K1双等位基因敲除。本研究利用CRISPR/Cas9技术得到H2-K1基因敲除的小鼠ES细胞株,为MHCⅠ类基因的敲除和置换提供了参考。

主 题 词：H2-K1基因 CRISPR/Cas9技术 m ES细胞 基因敲除 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13471/j.cnki.acta.snus.2017.02.002

馆 藏 号：203218771...