大片吸虫成虫cDNA文库的构建和组织蛋白酶L1基因的克隆

作     者：郭敏 徐梅倩 岳城 何国声 GUO Min;XU Mei-qian;YUE Cheng;HE Guo-sheng

作者机构：新疆农业大学乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 

基　　金：畜禽主要寄生虫虫种资源的收集与保存(2002DEB10050) 

出 版 物：《中国兽医寄生虫病》 (Chinese Journal of Veterinary Parasitology)

年 卷 期：2007年第15卷第3期

页      码：25-28页

摘      要：目的大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)基因的克隆。方法提取大片吸虫成虫总RNA,运用SMART技术构建大片吸虫cDNA文库。根据文献设计并合成PCR引物,从上述文库中克隆大片吸虫FgCL1基因,定向克隆至原核表达载体pET28a中。结果文库容量为2.08×106pfu/mL,重组率为98%。扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp。应用两个已知基因(FgCL1 FgGST)从文库中成功钓取到相应的全长基因。将含有FgCL1的阳性克隆测序,用Genebank Blast进行序列比较,证实为FgCL1基因。结论成功构建了cDNA文库,提供筛选大片吸虫基因资源;从该文库中克隆出FgCL1,为进一步表达该基因,研制诊断试剂盒创造了条件。

主 题 词：大片吸虫 cDNA文库 组织蛋白酶L1 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2007.03.007

馆 藏 号：203219884...