2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测

作     者：孙卫平 吴倩倩 范伟伟 张剑 李超龙 王长军 潘秀珍 高基民 SUN Wei-ping;WU Qian-qian;FAN Wei-wei;ZHANG Jian;LI Chao-long;WANG Chang-jun;PAN Xiu-zhen;GAO Ji-min

作者机构：温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325000 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81571965 81172794 81071317 81471920) 江苏省自然科学基金项目(No.BK20151091) 江苏省333工程科研资助项目(No.BRA2014363) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2017年第12卷第4期

页      码：302-305页

摘      要：目的原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性。方法对*** 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET28a,转化*** BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达目的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析。结果构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应。结论成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在*** 2致病过程中的作用奠定了基础。

主 题 词：2型猪链球菌 原核表达 天冬氨酸激酶 多克隆抗体 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.170404

馆 藏 号：203220652...