用于筛选顺式反应元件的慢病毒启动子报告载体随机文库的构建

作     者：周雪莹 曹铁生 刘向伟 韦梦影 杨国栋 袁丽君 ZHOU Xueying CAO Tiesheng LIU Xiangwei WEI Mengying YANG Guodong YUAN Lijun

作者机构：第四军医大学唐都医院超声科陕西西安710038 第四军医大学口腔医院种植科陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 

基　　金：国家自然科学基金(81101050 81671690) 

出 版 物：《西部医学》 (Medical Journal of West China)

年 卷 期：2017年第29卷第4期

页      码：455-461页

摘      要：目的建立含有随机序列与miniCMV融合的启动子,驱动抗生素耐药基因的表达;用于筛选和寻找不同处理条件下的反应性元件。方法设计针对Puromycin抗性基因,即嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(puromycin N-acetyltransferase gene,PAC)的引物,扩增目的条带并通过PacI+Pme1限制性内切酶克隆至目的载体pWPI;然后,设计并合成接头序列+20N随机序列+miniCMV的融合片段,通过PCR的方法得到双链序列,并进行酶切,通过Cla1+PacI克隆入前述pWPI-PAC载体。克隆得到的载体组合即为慢病毒反应元件筛选报告载体文库。在此基础上,我们将报告载体文库转染细胞,并进行超声照射。超声照射剂量为10min,100mW/cm2。每天一次,一共照射3天。每次超声照射后,对细胞进行puromycin处理。4天后,收集超声照射存活细胞,提取DNA,PCR扩增含有20N的序列并进行测序鉴定。结果我们成功设计了一套文库构建方案,初步构建了20N随机序列+miniCMV+Puromycin抗性基因的文库。将该文库转染细胞,超声照射后可以增加转染有对超声反应克隆细胞中抗性基因表达;我们通过获取Puromycin处理后的存活细胞,发现了潜在的对超声反应的调控元件。结论我们构建的20N随机序列+miniCMV+Puromycin抗性基因文库,可以用于筛选对超声等特定条件有表达调控反应的顺式反应元件;进而为该元件控制基因表达提供依据。

主 题 词：文库构建 顺式反应元件 超声 筛选 

学科分类：0831[工学-公安技术类] 100207[100207] 1002[医学-临床医学类] 08[工学] 1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-3511.2017.04.003

馆 藏 号：203221345...