猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的构建

作     者：施开创 郭鑫 杨汉春 李焕荣 盖新娜 陈艳红 查振林 SHI Kai-chuang;GUO Xin;YANG Han-chun;LI Huan-rong;GE Xin-na;CHEN Yan-hong;CHA Zhen-lin

作者机构：中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京海淀100094 

基　　金：国家自然科学基金项目(30371072) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2007年第43卷第4期

页      码：10-12页

摘      要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7和猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR/PCR扩增,分别扩增出大小为308 bp和417 bp的部分基因片段。用T4连接酶将目的片段与pGEM-Teasy载体系统连接,并转化到大肠杆菌DH-5α株感受态细胞。提取的质粒经PCR、酶切和测序鉴定,证实为PRRSV和PCV2的阳性重组质粒。将重组标准质粒10倍系列稀释后作为模板,通过实时荧光定量PCR方法(Real-time PCR),建立了PRRSV、PCV2的标准曲线及其直线回归方程,并确定其最佳读板温度。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点,为分析PRRSV和PCV2共感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台。

主 题 词：PRRSV PCV2 实时荧光定量PCR 重组质粒 标准曲线 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0529-6005.2007.04.003

馆 藏 号：203224588...