人降钙素原的原核表达、纯化和鉴定

作     者：付涛 苏丹华 刘原 刘卿 吴亮 陈盛霞 姜旭淦 FU Tao SU Dan-hua LIU Yuan LIU Qing WU Hang CHENG Sheng-xia JIANG Xu-gan

作者机构：江苏大学医学院江苏镇江212013 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2017年第35卷第3期

页      码：226-229页

摘      要：目的构建人降钙素原(procalcitonin,PCT)原核表达载体,获得高纯度PCT重组蛋白。方法根据NCBI上PCT基因序列设计引物,利用PCR技术扩增PCT基因,构建PCT/p ET-22b(+)重组表达载体,转化至大肠埃希菌(***)BL21中诱导表达;采用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,用western blot和胶体金法对其进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增产物约为350 bp。同源性比对分析结果表明,PCT基因片段(348 bp)成功插入p TG19-T载体,未出现碱基突变。用Bam HⅠ和HindⅢ对重组表达载体双酶切,得到约为350 bp和5 500 bp片段。SDS-PAGE电泳显示PCT重组蛋白以可溶性形式存在,Mr约14 000,经镍柱亲和层析法纯化后即可获得。western blot和PCT胶体金法结果呈阳性,显示融合蛋白含组氨酸标签(His-tag),成功表达出PCT重组蛋白。结论应用重组DNA技术成功构建PCT基因融合重组表达载体,通过蛋白质表达纯化技术获得PCT融合蛋白。

主 题 词：降钙素原 原核表达 纯化 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2017.03.19

馆 藏 号：203225009...