靶向CCR7基因shRNA表达载体的构建及鉴定

作     者：孙仁虎 李疆 崔静 吕清 刘兴华 王国斌 

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院腹腔镜中心武汉430022 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30772128) 

出 版 物：《华中医学杂志》 (Central China Medical Journal)

年 卷 期：2009年第33卷第1期

页      码：6-8,27页

摘      要：目的设计并构建靶向CCR7基因shRNA真核表达质粒,并检测其干扰效果。方法以CCR7为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pGC-silencer-CRM30载体,构建的3条重组短发夹shR-NA表达载体分别命名为pGC-silencer-CRM30-CCR7A、-CCR7B和-CCR7C。采用测序法鉴定寡核苷酸序列。将构建好的真核表达载体转染人结肠癌SW480细胞,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR法检测CCR7干扰效率。结果重组质粒测序结果与Genebank中的CCR7cDNA序列相符,转染SW480细胞后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白,RT-PCR结果表明,pGC-silencer-CRM30-CCR7C干扰效果最强。结论靶向CCR7基因shRNA表达载体构建无误,为进一步探讨趋化因子受体CCR7在胃肠道恶性肿瘤生物学行为中的作用奠定了基础。

主 题 词：RNA干扰 短发卡RNA 趋化因子 CCR7 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203225151...