基于miR30的靶向DcR_3慢病毒干扰载体的构建及鉴定

作     者：熊刚 许雪青 陈雪丹 郭洪 李娟 王凯 蒋耀光 

作者机构：第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部医学遗传教研室重庆400038 大坪医院野战外科研究所全军胸外科中心重庆400042 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2009年第38卷第12期

页      码：1477-1479,I0002页

摘      要：目的构建基于miR30的靶向DcR3慢病毒干扰载体。方法人工设计针对DcR3编码区的干扰序列,使其转录后RNA结构类似于miR30结构,茎杆序列替换成DcR3序列,送上海生物工程技术服务有限公司合成。以该序列为模板,分别利用携带EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物行PCR扩增,通过酶切连接的方式将插入片段连入p201慢病毒载体骨架中。经酶切和测序鉴定后,用包装质粒pMD2G及包膜质粒psAX2共同转染293FT细胞进行病毒包装。病毒包装上清液加入培养的人食管鳞癌细胞系KYSE150细胞中,用FACS分选后进行RT-PCR和Western blot检测DcR3表达情况。结果构建了针对DcR3的3条慢病毒干扰载体,成功包装出病毒,并不同程度地抑制了DcR3蛋白的表达。结论基于miR-30的DcR3能有效抑制DcR3表达,为进一步研究DcR3功能打下了基础。

主 题 词：DcR3 RNA干扰 慢病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2009.12.032

馆 藏 号：203225427...