RNA干扰沉默p300基因对亚溶解型C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡和ATF3乙酰化的影响

作     者：张婧 何风霞 邱文 赵聃 卢燕来 王迎伟 Zhang Jing He Fengxia Qiu Wen Zhao Dan Lu Yanlai Wang Yingwei

作者机构：南京医科大学免疫学系江苏南京211166 

基　　金：江苏省高校自然科学研究面上项目(14KJB310006) 南京医科大学基础医学院优势学科教师培养基金(JX10131802/007) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2017年第37卷第3期

页      码：275-280页

摘      要：目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)凋亡和激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)乙酰化水平的影响。方法:用DNA重组技术针对p300基因不同位点设计3个shRNA序列,然后分别克隆到真核表达载体pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中,经电转染入GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。Western blot筛选干涉效果最佳的p300 shRNA,流式细胞术检测GMC凋亡率,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western blot联合检查ATF3乙酰化水平。结果:核酸测序表明p300 shRNA重组质粒构建成功。Western blot显示p300 shRNA-2具有最佳沉默效率。p300 shRNA处理GMC后,由sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡率显著下降,同时ATF3乙酰化水平也明显降低。结论:成功构建了大鼠p300 shRNA真核表达质粒,并初步证实了p300能够促进sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡,其机制可能与p300乙酰化修饰ATF3有关。

主 题 词：RNA干扰 p300 亚溶解型C5b-9 凋亡 乙酰化 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20170304

馆 藏 号：203225801...