酮古龙酸菌细胞色素c基因的克隆及表达

作     者：贾宁 熊向华 赵岩 汪建华 何建勇 张惟材 JIA Ning;XIONG Xiang-Hua;ZHAO Yan;WANG Jian-Hua;HE Jian-Yong;ZHANG Wei-Cai

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 沈阳药科大学辽宁沈阳110016 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2010年第21卷第5期

页      码：619-622页

摘      要：目的:从酮古龙酸菌SCB329中分离细胞色素c(Cytc)相关基因,在大肠杆菌中进行表达并验证。方法:根据酮古龙酸菌SCB329基因组序列设计引物,通过PCR从SCB329基因组中扩增cytc基因,酶切后连接pET22b表达载体,转化至大肠杆菌DH5α后提取质粒,经PCR、质粒双酶切及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),并对表达条件进行考察;用Chelating Sepharose珠粒对可溶性的Cytc-His融合蛋白进行纯化;经光谱扫描和血红素染色等方法对表达蛋白定性分析。结果:PCR扩增的cytc基因长513 bp;重组菌在IPTG浓度为0.025 mmol/L的条件下,于28℃诱导10 h后,SDS-PAGE分析可见表达条带,相对分子质量约为18×103;Ni柱亲和层析纯化得到目的蛋白,纯化蛋白经光谱扫描呈现Cytc特征峰,血红素染色呈现阳性结果。结论:从酮古龙酸菌SCB329中分离得到一种cytc基因,并表达纯化了融合蛋白Cytc-His,纯化蛋白呈现Cytc特性,为研究酮古龙酸菌中产酸关键酶的电子传递机制奠定了基础。

主 题 词：细胞色素c 酮古龙酸菌 表达 电子传递 血红素染色 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2010.05.005

馆 藏 号：203225946...