沉默TSP-1基因对亚溶解型C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

作     者：吴宜琴 车楠 冯雪凤 邱文 王迎伟 WU Yi-qin;CHE Nan;FENG Xue-feng;QIU Wen;WANG Ying-wei

作者机构：南京医科大学微生物与免疫学系江苏南京210029 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31000396 81072402) 江苏省高校自然科学基金资助项目(10KJB310006) 南京医科大学科技发展基金面上资助项目(09NJMUM003) 南京医科大学基础医学院青年教师培养基金资助项目(09JC007) 

出 版 物：《江苏大学学报（医学版）》 (Journal of Jiangsu University：Medicine Edition)

年 卷 期：2011年第21卷第5期

页      码：369-374页

摘      要：目的:研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖的影响。方法:设计合成针对TSP-1基因的发夹式siR-NA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,将TSP-1 shRNA(shTSP-1)转染体外培养的大鼠GMC,再给予亚溶解型C5b-9刺激。以实时PCR和蛋白质印迹法检查各组GMC中TSP-1、细胞周期蛋白D2(cyclin D2)及增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA及蛋白表达情况。另用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymi-dine incorporation,3H-TdR)和CCK-8(cell counting kit-8)方法分别检查GMC的DNA合成及细胞数量的改变。最后,观察各组GMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况。结果:使用shTSP-1沉默TSP-1基因,对于亚溶解型C5b-9刺激GMC后18 h诱导的cyclin D2和PCNA表达及DNA合成均无显著影响,但是shTSP-1能够抑制亚溶解型C5b-9刺激GMC 54 h时细胞数量的增加,同时能下调由亚溶解型C5b-9刺激GMC引起的α-SMA表达。结论:用shTSP-1沉默GMC中的TSP-1基因,可抑制亚溶解型C5b-9刺激GMC的增殖和α-SMA的合成,shTSP-1对GMC增殖的影响可能与其下调α-SMA的表达有一定关系。

主 题 词：肾小球系膜细胞 亚溶解型C5b-9复合物 血小板反应蛋白-1 增殖 α-平滑肌肌动蛋白 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7783.2011.05.001

馆 藏 号：203226379...