小干扰RNA对结肠癌细胞株TLR4沉默效果的分析

作     者：张燕 江波 张婷 茆勇 高翔 华东 ZHANG Yan;JIANG Bo;ZHANG Ting;MAO Yong;GAO Xiang;HUA Dong

作者机构：苏州大学附属第四医院肿瘤科无锡市肿瘤研究所无锡214062 

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目(BK2010161) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2012年第29卷第3期

页      码：443-445页

摘      要：目的建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应（PCR）TLR4检测方法，构建标准曲线，并测定小干扰RNA（siRNA）沉默TLR4的效率。方法设计TLR4qPCR扩增引物，以SYBRGreenq PCR mastermix，95℃15min，95℃15S，60℃1min50个循环进行扩增，同时1：4稀释阳性对照，构建标准曲线。以65℃为起点，0．5℃为阶梯逐步增加至95℃，于每个温度点测定荧光强度，获得熔解曲线。Lipofectamine^TM2000介导不同浓度的siRNA（60、80、100nmol/L）转染SW480细胞6h后撤除。分别于24、48h后，使用qPCR检测TLR4mRNA水平表达变化。结果（1）SYBRGreen定量检测TLR4扩增曲线呈典型s型动力学曲线，扩增效率为100．9％，熔解曲线成单峰，熔解温度为81．5℃。（2）siRNA在24h、80nmol/L时，TLR4Ct值为27．72，较未干扰组（25．96）明显增加。（3）琼脂糖凝胶电泳显示转染组（24h、80nmoWL）在PCR扩增28个循环时不能被检出，而阳性对照则扩增条带清晰。结论（1）qPCR检测TLR4方法稳定，结果可靠。（2）siRNA浓度80nmol/L，可对肠癌SW480细胞的TLR424h时的表达水平明显抑制。

主 题 词：肠癌 转染 siRNA Toll样受体4 SW480细胞株 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2012.03.033

馆 藏 号：203226665...